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技術(shù)文獻(xiàn)

使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要

文字:[大][中][小] 2019-4-15    瀏覽次數(shù):867    
       當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí),研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開,用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái),檢查HEPA過濾器。 高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性,因而,做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。下面是我司推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟: 
1. 在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞,稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。 
     2. 分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個(gè)小培養(yǎng)瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。 
 
3. 每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo),如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。  

4. 確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2~3代。 

    5. 在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。 

    6. 重復(fù)步驟4。 

    7. 在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4~6代,確定污染是否以已被消除。  
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