兔抗人多克隆抗體 BRCA操作步驟

1 . 切片常規脫蠟至水。如需抗原修復,可在此步后進行

⒉ 緩沖液洗  3min/2  次。

⒊ 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在  Hydrogen Peroxide Block  中孵育  10-15  分鐘。

⒋ 緩沖液洗  5min/2  次。

⒌ 滴加  Ultra V Block  , 在室溫下孵育  5  分鐘以封閉非特異性的背景染色。

(注:孵育不要超過  10  分鐘,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有  5  -  10%  正常羊血清,這一步可以省略。)

⒍ 緩沖液洗  5min/2  次。

⒎ 滴加一抗工作液  37  ℃孵育  1  -  2  小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)

⒏ 緩沖液洗  5min/2  次。

9  . 滴加  Primary Antibody Enhancer (增強子),在室溫下孵育  20  分鐘。

10  .緩沖液洗  5min/2  次。

11  .滴加  HRP Polymer (酶標二抗) ,在室溫下孵育  30  分鐘。

(注: HRP Polymer  對光敏感,應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)

12  .緩沖液洗  5min/2  次。

13  .向  1ml DAB Plus Substrate  (或  AEC Plus Substrate)  中滴加  1-2  滴  DAB Plus Chromogen  (或  AEC Plus Chromogen ),混勻后滴加到切片上,孵育  3  -  15  分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)

14  .自來水充分沖洗,復染 ,脫水,透明,封片。

H-97(人高轉移肝癌細胞)
HCC94(人子宮鱗癌細胞（高分化）)
HCCLM3(人高轉移肝癌細胞)
HEL(人紅白細胞白血病細胞)
HELF(人胚肺成纖維細胞)
HO-8910PM(人高轉移卵巢癌細胞)
Ishikawa(人子宮內膜癌細胞)
L-O2(人正常肝細胞)
M1(小鼠白血病細胞)
M14(人黑色素瘤細胞)
MA-891(小鼠乳腺癌高轉移細胞)
MDA-MB-435(人乳腺癌高轉移細胞)
MDA-MB-468(人乳腺癌細胞)
MKN-28(人胃癌高轉移細胞)
MKN45(人胃癌細胞)
MuM-2B(人眼脈絡黑色素瘤細胞)
MuM-2C(人眼脈絡黑色素瘤細胞)
MV3(人黑色素瘤細胞)
MX-1(人乳腺癌細胞)
NCI-H1975(人肺腺癌細胞)
NCI-H460(人肺癌細胞)
NCI-H661(人大細胞肺癌細胞)
M-NFS-60 (小鼠白血病細胞G-CSF依賴性)
PA319(人大腸癌細胞)
PATU8988(人胰腺癌細胞)