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技術文獻

上海研生實業?大鼠血管組織提取物實驗報告

文字:[大][中][小] 2022-10-13    瀏覽次數:818    
上海研生實業大鼠血管組織提取物實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將組織剪成1mm3左右大?。?br /> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織完全被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

   

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人神經星形膠質細胞完全培養基
人神經小膠質細胞完全培養基
人腦微血管內皮細胞完全培養基
人腦成纖維細胞完全培養基
人小腦顆粒細胞完全培養基
人晶狀體上皮細胞完全培養基
人角膜上皮細胞完全培養基
人視網膜色素上皮細胞完全培養基
人視網膜微血管內皮細胞完全培養基
人角膜成纖維細胞完全培養基
人小梁網細胞完全培養基
人視網膜muller細胞完全培養基
人角膜內皮細胞完全培養基
人脈絡膜微血管細胞完全培養基
人牙周膜成纖維細胞完全培養基
大鼠肺微血管內皮細胞完全培養基
大鼠肺血管平滑肌細胞完全培養基
大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞完全培養基
大鼠氣管上皮細胞完全培養基
大鼠氣管平滑肌細胞完全培養基




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