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技術(shù)文獻(xiàn)

應(yīng)如何快速消除ELISA干擾?

文字:[大][中][小] 2025-8-12    瀏覽次數(shù):430    
     有稀釋標(biāo)本、改變酶標(biāo)抗體、標(biāo)本中RF用變性IgG預(yù)先封閉、測(cè)定抗原時(shí)加入還原劑、包被或酶標(biāo)二抗使用特異的雞抗體IgY、對(duì)臨床血清標(biāo)本加熱滅活補(bǔ)體、使用特異的兔F(ab’)2片段作為固相或測(cè)定酶標(biāo)抗體、在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig、使用靶特異的非Ig親和蛋白替代固相或酶標(biāo)抗體之一等方法。
稀釋標(biāo)本
     在測(cè)定前對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋,特異的IgM因高滴度存在仍可檢出,而非特異的RF則會(huì)因?yàn)橄♂屪兂煞浅5偷牡味龋瑥亩?對(duì)測(cè)定幾乎不產(chǎn)生干擾。

改變酶標(biāo)抗體
    將待酶標(biāo)的抗體的F片段酶切夫除,僅留下具有特異結(jié)合功能的F(ab’)2部分標(biāo)記酶,則在測(cè)定中即可避免RF的干擾。

標(biāo)本中RF用變性IgG預(yù)先封閉
   將經(jīng)熱變性(63℃,10min)的動(dòng)物如兔、羊等的IgG加入到標(biāo)本稀釋液中,或是將該變性IgG連接至一顆粒固相如聚苯乙烯微球或微孔,然后加入臨床血清標(biāo)本,反應(yīng)后,再吸出標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)2。

測(cè)定抗原時(shí)加入還原劑
    在標(biāo)本中加入可使RF降解的還原劑,如2—巰基乙醇。2—巰基乙醇等還原劑可使抗體內(nèi)的巰基裂解,因而可以去除RF的干擾,但只適用于抗原測(cè)定。

包被或酶標(biāo)二抗使用特異的雞抗體IgY
    RF不與雞IgY反應(yīng),如果包被和酶標(biāo)二抗均為雞IgY抗體,則不受標(biāo)本中RF的干擾2。

對(duì)臨床血清標(biāo)本加熱滅活補(bǔ)體
   采用56℃30min加熱可使標(biāo)本中的補(bǔ)體C1滅活。

使用特異的兔F(ab’)2片段作為固相或測(cè)定酶標(biāo)抗體
    異嗜性抗體可通過交聯(lián)固相和酶標(biāo)的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。使用特異的兔F(ab’)2片段作為固相或測(cè)定酶標(biāo)抗體可以避免這種干擾。

在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig
封閉可能存在的異嗜性抗體,從而避免其干擾。

使用靶特異的非Ig親和蛋白替代固相或酶標(biāo)抗體之一
這種方法可以避免異嗜性抗體的干擾。

以上方法可以幫助快速消除ELISA干擾。在實(shí)際操作中,可以根據(jù)具體情況選擇合適的方法或組合使用多種方法。
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