環孢子蟲探針法熒光定量PCR（qPCR）的核心原理基于?TaqMan探針技術?，通過熒光信號的實時監測實現目標DNA的定量分析。其具體機制如下：

?探針設計?
探針為一段與環孢子蟲目標序列互補的寡核苷酸，兩端分別標記?熒光報告基團（如FAM）?和?淬滅基團（如TAMRA）?。當探針完整時，報告基團的
熒光被淬滅基團吸收，無信號輸出?。

?PCR擴增與探針降解?

?退火階段?：探針與目標DNA結合，形成雜交雙鏈。
?延伸階段?：Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放報告基團，熒光信號被檢測系統捕獲?。
?信號累積?：每擴增一條DNA鏈，對應一個熒光分子釋放，信號強度與目標DNA量呈正比?。
?定量分析?
通過監測熒光信號達到閾值（Ct值）所需的循環數，結合標準曲線計算初始模板濃度?。

技術優勢
?高特異性?：探針僅與目標序列結合，避免非特異性擴增干擾?。

?高靈敏度?：可檢測低至100拷貝的模板?。

?封閉反應?：無需開蓋操作，減少污染風險?。

與染料法的區別
探針法通過特異性探針識別目標序列，而染料法（如SYBR Green）僅結合所有雙鏈DNA，特異性較低但成本更低?。