非特異性結果洗滌不充分可能導致多種非特異性結果，影響實驗的準確性和可靠性。間接 ELISA 中洗滌不充分，核心是導致未結合的抗體、酶標物或樣品雜質殘留，進而引發兩類非特異性結果：非特異性顯色（假陽性 / 背景升高） 和信號干擾（結果重復性差），具體表現如下：

一、核心非特異性結果：非特異性顯色

陰性對照假陽性

陰性對照（不含目標抗原的樣品）本應僅產生極低信號，但若洗滌不充分，未結合的一抗（針對目標抗原的抗體）或酶標二抗（偶聯 HRP/AP 的抗體）會殘留于孔壁。這些殘留抗體與后續加入的底物反應，導致陰性對照吸光度（A 值）顯著升高（如超過 0.2，具體看試劑盒標準），誤判為 “陽性”，即假陽性結果。

低濃度陽性樣品信號偏高（假高值）

對于低濃度目標抗原的陽性樣品，洗滌不充分帶來的殘留酶標二抗，會與特異性結合產生的酶標信號疊加。這種疊加會使檢測到的 A 值遠高于真實濃度對應的信號，導致計算出的抗原濃度偏高，出現假高值，干擾對樣品中目標物質真實含量的判斷。

空白對照背景異常升高

空白對照（僅加底物和終止液，無樣品 / 抗體）的信號代表試劑本底，正常應極低（如 < 0.1）。若洗滌不充分，前一樣品殘留的酶標二抗、雜蛋白或樣品雜質會污染空白孔，或洗滌液中混入酶標物，導致空白對照 A 值異常升高，掩蓋真實信號差異，甚至使整個實驗數據無效。
二、次要非特異性結果：信號干擾與結果不可靠

結果重復性差（CV 值超標）

洗滌不充分時，每孔殘留的未結合物質含量不一致（如部分孔殘留多、部分孔殘留少）。即使檢測相同濃度的標準品或樣品，不同孔的 A 值也會出現顯著波動，導致重復檢測的變異系數（CV）超過 10%（常規要求），實驗結果無法重復，失去統計意義。

標準曲線線性不佳

標準曲線依賴不同濃度標準品的 A 值呈線性關系（R2≥0.99）。若洗滌不充分，低濃度標準品孔因殘留酶標二抗，信號被過度拉高；高濃度標準品孔的特異性信號與殘留信號疊加后，可能出現 “平臺期提前” 或信號偏離理論值，導致標準曲線線性斷裂，無法準確計算樣品濃度。