大鼠表皮角化細(xì)胞

大鼠表皮角化細(xì)胞分離自皮膚組織；表皮位于動(dòng)物皮膚的外層，由胚胎時(shí)期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。依據(jù)細(xì)胞的分化狀態(tài)、功能類(lèi)型可以分為多種細(xì)胞類(lèi)型，表皮角化上皮細(xì)胞與角質(zhì)形成細(xì)胞核心細(xì)胞群體本質(zhì)是同一細(xì)胞群體，前者從“表皮屬角化復(fù)層扁平上皮”的組織屬性命名，后者從“合成角蛋白、執(zhí)行角化功能”的功能特征命名，二者均涵蓋表皮從基底層增殖細(xì)胞到角質(zhì)層終末細(xì)胞的全分化譜系，且占表皮細(xì)胞總量超90%，是表皮屏障功能的核心載體。在這一分化譜系中，存在明確的階段差異基底層細(xì)胞是角質(zhì)形成細(xì)胞的“增殖源頭”，呈柱狀、有完整活性細(xì)胞核，以K5、K14、Ki-67、干細(xì)胞標(biāo)志物p63為核心，無(wú)角化相關(guān)蛋白，未啟動(dòng)角化，一般描述為角化形成細(xì)胞/角質(zhì)形成細(xì)胞/角化上皮細(xì)胞等；當(dāng)細(xì)胞遷移至棘層中上部至顆粒層，成為“角化細(xì)胞”——這是仍含固縮細(xì)胞核（但細(xì)胞器減少）的中間活細(xì)胞，能主動(dòng)合成角蛋白與絲聚蛋白前體，處于“正在角化”的執(zhí)行階段，表達(dá)切換為K1、K10為主，同時(shí)表達(dá)絲聚蛋白前體（絲聚合蛋白原，顆粒層特征）、轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶1（TG1，促進(jìn)角蛋白交聯(lián)），Ki-67陰性；最終角化細(xì)胞進(jìn)一步退化，在角質(zhì)層形成“角質(zhì)細(xì)胞”（角質(zhì)層終末細(xì)胞），這是無(wú)細(xì)胞核、無(wú)細(xì)胞器的終末細(xì)胞，胞質(zhì)充滿(mǎn)交聯(lián)角蛋白纖維，通過(guò)細(xì)胞間連接構(gòu)成表皮物理屏障，無(wú)核相關(guān)標(biāo)志物，以終末成熟標(biāo)志物兜甲蛋白、小富脯蛋白（SPRRs）為特征，K1、K10持續(xù)存在但無(wú)活性合成功能；PCNA是增殖細(xì)胞的標(biāo)志物，表皮角質(zhì)形成細(xì)胞在基底層（增殖活躍區(qū)）可能表達(dá)PCNA，而終末分化層（角質(zhì)層）可能不表達(dá)，細(xì)胞在不同增殖狀態(tài)表達(dá)量不一樣；這四種細(xì)胞的核心差異在于分化階段（全階段/中間態(tài)/終末態(tài)）、形態(tài)（核與細(xì)胞器有無(wú)/活性）及功能（增殖/合成/屏障），且存在“角質(zhì)形成細(xì)胞（表皮角化上皮細(xì)胞）包含角化細(xì)胞與角質(zhì)細(xì)胞”的邏輯關(guān)系。表皮也包含其他非角化上皮細(xì)胞黑色素細(xì)胞（Melanocytes）、朗格漢斯細(xì)胞（Langerhanscells）、Merkel細(xì)胞等。

自備試劑： 0.25%胰蛋白酶  、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL）  、PBS  、完全培養(yǎng)基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養(yǎng)基： 大鼠表皮角化細(xì)胞完全培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 不增殖；不傳代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠表皮角化細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠表皮角化細(xì)胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠表皮角化細(xì)胞經(jīng)K1免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。