大鼠鼓膜表皮干細胞

大鼠鼓膜表皮干細胞分離自大鼠鼓膜表皮組織。鼓膜是外耳道與中耳腔之間的半透明薄膜，核心功能為分隔外耳與中耳、傳導聲波，其表皮層為復層扁平上皮，鼓膜表皮干細胞是該層的關鍵成體干細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，可定向分化為成熟的鼓膜表皮角質形成細胞，在鼓膜損傷修復、表皮層完整性維持及正常生理功能保障中發揮核心作用。大鼠鼓膜表皮干細胞原代培養3天后開始貼壁，形態呈圓形或橢圓形，核大而圓、居中，胞漿少；培養1-2周后增殖形成克隆樣集落，集落內細胞排列緊密、形態均一；傳代后細胞保持干細胞特性，生長穩定、增殖旺盛，可穩定表達表皮干細胞相關標志物。該細胞是研究鼓膜表皮再生機制、鼓膜損傷修復病理過程及耳科相關疾病發病機制的理想實驗模型。

培養基：大鼠鼓膜表皮干細胞完全培養基（含FBS、表皮生長因子、胰島素、Penicillin、Streptomycin等）

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁生長，呈克隆樣增殖

細胞形態：圓形、橢圓形（未分化狀態），增殖期可呈短梭形

傳代比例：1:2-1:3

傳代特性：可穩定傳代6-8代；3-5代以內干細胞特性最穩定，狀態最佳

消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液

大鼠鼓膜表皮干細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。

方法簡介：實驗室采用胰蛋白酶-EDTA聯合消化法結合差速貼壁法及克隆篩選法制備該細胞，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測：經表皮干細胞特異性標志物（CK19、p63）免疫熒光鑒定，本細胞純度可達90%以上；經檢測不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等外源污染物，細胞活性良好。