兔鼓膜上皮干細(xì)胞

兔鼓膜上皮干細(xì)胞分離自兔鼓膜上皮組織，是具有自我更新和多向分化潛能的干細(xì)胞。核心功能為自我更新維持細(xì)胞群體穩(wěn)定，分化為成熟的鼓膜上皮細(xì)胞，參與鼓膜的損傷修復(fù)和再生過程；形成鼓膜上皮屏障，抵御外耳道病原體侵襲和機(jī)械性損傷，維持鼓膜的正常生理功能。功能異常與鼓膜穿孔不愈合、中耳炎、鼓膜硬化等耳部疾病密切相關(guān)。原代培養(yǎng)3-4天后開始貼壁，初始形態(tài)呈圓形或多邊形；傳代后細(xì)胞生長旺盛，可穩(wěn)定維持干細(xì)胞的自我更新能力及分化潛能。是研究鼓膜再生機(jī)制、耳部疾病發(fā)病機(jī)制及組織工程修復(fù)材料篩選的重要實(shí)驗(yàn)材料。

自備試劑：0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液、PBS緩沖液、完全培養(yǎng)基

培養(yǎng)基：兔鼓膜上皮干細(xì)胞完全培養(yǎng)基（含FBS、表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、Penicillin、Streptomycin等）

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)：圓形、多邊形

傳代比例：1:2

傳代特性：可傳5-7代；2-4代以內(nèi)細(xì)胞狀態(tài)最佳，功能最穩(wěn)定

消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液

兔鼓膜上皮干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介：實(shí)驗(yàn)室采用胰蛋白酶-EDTA聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備該細(xì)胞，通過特定消化體系溫和分解兔鼓膜上皮組織，分離獲得單個(gè)核細(xì)胞后，利用干細(xì)胞與其他細(xì)胞貼壁速度的差異進(jìn)行純化，最終獲得高純度的兔鼓膜上皮干細(xì)胞，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測：經(jīng)干細(xì)胞特異性標(biāo)志物（CK19、p63、SOX2）及上皮細(xì)胞標(biāo)志物（CK14）免疫熒光鑒定，本細(xì)胞純度可達(dá)90%以上；經(jīng)成球?qū)嶒?yàn)及分化潛能檢測驗(yàn)證細(xì)胞功能正常；經(jīng)檢測不含有支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等外源污染物，細(xì)胞活性達(dá)標(biāo)。